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学科主题临床检验诊断学
人肌酸激酶MM同工酶在大肠杆菌中的高效可溶性表达及纯化研究
其他题名High-level expression and purification of human creatine kinase MM isozymes in E.coli
黄燕; 杨文双; 徐国宾; 夏铁安
关键词人肌酸激酶mm同工酶 校准品 金属螯合亲和层析 稳定性
刊名临床检验杂志
2006
DOI10.3969/j.issn.1001-764X.2006.04.023
24期:4页:302-305
收录类别中国科技核心期刊 ; 中文核心期刊 ; CSCD
文章类型Journal Article
摘要目的构建肌酸激酶MM同工酶原核表达系统,纯化重组酶蛋白并对其稳定性进行研究,为其作为参考品或校准品应用于临床奠定基础.方法提取胎儿心肌组织总RNA,反转录扩增人肌酸激酶M亚基基因,构建pET-15b-CK、E.coli BL21(DE3)pLysS原核表达系统,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达.利用重组蛋白的组氨酸标签(His-tag)进行金属螯合亲和层析纯化,观察重组酶在不同保存条件下的稳定性.结果重组质粒经酶切及测序鉴定与预期相符,诱导表达后细菌裂解液上清酶活性可达280 000 U/L,纯化后SDS-PAGE在分子量45 000处显示单一蛋白条带,在-20 ℃加入70 g/L BSA、1 mmol/L DTT、2 mmol/L EDTA的PBS(pH 7.4)保存体系中,重组酶活性在30 d观察期内基本不变.结论成功表达并纯化了人肌酸激酶MM同工酶,重组酶稳定性良好,初步具备了作为基因工程人源酶校准品的基本特点.
语种中文
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文献类型期刊论文
条目标识符http://ir.bjmu.edu.cn/handle/400002259/43577
专题北京大学第一临床医学院_检验科
作者单位北京大学第一医院检验科,北京,100034
推荐引用方式
GB/T 7714
黄燕,杨文双,徐国宾,等. 人肌酸激酶MM同工酶在大肠杆菌中的高效可溶性表达及纯化研究[J]. 临床检验杂志,2006,24(4):302-305.
APA 黄燕,杨文双,徐国宾,&夏铁安.(2006).人肌酸激酶MM同工酶在大肠杆菌中的高效可溶性表达及纯化研究.临床检验杂志,24(4),302-305.
MLA 黄燕,et al."人肌酸激酶MM同工酶在大肠杆菌中的高效可溶性表达及纯化研究".临床检验杂志 24.4(2006):302-305.
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