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学科主题临床检验诊断学
睾丸酮丛毛单胞菌的分离和鉴定及3α-羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中的克隆表达
其他题名Isolation and identification of Comamonas testosteroni: cloning and overexpression of 3α-hydroxysteroid dehydrogenase in E.coli.
张国华1; 丛爱日1; 徐国宾1; 孙立颖1; 严岩1; 夏铁安1
关键词睾丸酮丛毛单胞菌 3-α-羟类固醇脱氢酶 聚合酶链反应 胆汁酸
刊名北京大学学报(医学版)
2005
DOI10.3321/j.issn:1671-167X.2005.02.023
37期:2页:203-206
文章类型Journal Article
摘要目的:从自然界中分离鉴定产3α-羟类固醇脱氢酶(3α-hydroxysteroid dehydrogenase,3α-HSD)的睾丸酮丛毛单胞菌,并在大肠杆菌(E.coli.)中克隆表达3α-HSD.方法:将池塘泥浆样品接种到以雄酮为唯一碳源的培养基中,对分离到的菌株根据形态学和生理生化特征进行初步鉴定.为进一步鉴定该菌株,根据睾丸酮丛毛单胞菌中的3α-HSD的基因设计引物,PCR扩增细菌基因组DNA,将扩增片段插入到载体pET15b中,构建重组质粒pET15b,并在E.coli. BL21(DE3)pLysS中进行诱导表达,对表达得到的蛋白进行鉴定并测定其酶活力.结果:一系列生化反应和培养特征证实,该菌与睾丸酮丛毛单胞菌的符合率为85%,最适生长pH值为7.0,最佳生长温度为30 ℃.在E.coli. BL21(DE3)pLysS中经诱导表达得到了相对分子质量约为29×103 具有酶活性的融合蛋白,可催化雄酮(3α-羟类固醇)脱氢.结论:从池塘泥浆中分离到一株产3α-HSD的睾丸酮丛毛单胞菌,并在E.coli.中表达得到了具有酶活性的融合3α-HSD.这为利用金属螯和亲和层析纯化融合3α-HSD,并进一步建立以其为工具酶的血清总胆汁酸酶循环测定方法奠定了基础.
语种中文
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文献类型期刊论文
条目标识符http://ir.bjmu.edu.cn/handle/400002259/43776
专题北京大学第一临床医学院_检验科
作者单位1.北京大学第一医院检验科,北京,100034
2.山东威海文登中心医院
推荐引用方式
GB/T 7714
张国华,丛爱日,徐国宾,等. 睾丸酮丛毛单胞菌的分离和鉴定及3α-羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中的克隆表达[J]. 北京大学学报(医学版),2005,37(2):203-206.
APA 张国华,丛爱日,徐国宾,孙立颖,严岩,&夏铁安.(2005).睾丸酮丛毛单胞菌的分离和鉴定及3α-羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中的克隆表达.北京大学学报(医学版),37(2),203-206.
MLA 张国华,et al."睾丸酮丛毛单胞菌的分离和鉴定及3α-羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中的克隆表达".北京大学学报(医学版) 37.2(2005):203-206.
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