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学科主题: 临床检验诊断学
题名:
3α-羟类固醇脱氢酶的表达、纯化和酶学性质研究
其他题名: Overexpression, Purification and Characterization of 3α-Hydroxysteriod Dehydrogenase in Escherichia coli
作者: 张国华1; 丛爱日1; 徐国宾1; 夏铁安1
关键词: 睾酮丛毛单胞菌 ; 3α-羟类固醇脱氢酶 ; 基因表达 ; 酶学性质 ; 胆汁酸
刊名: 微生物学报
发表日期: 2004
DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2004.04.019
卷: 44, 期:4, 页:496-499
收录类别: 中国科技核心期刊 ; 中文核心期刊 ; CSCD
文章类型: Journal Article
摘要: 从土壤中分离睾酮丛毛单胞菌,提取其基因组DNA,PCR扩增3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)基因.以质粒pET-15b为载体,构建3α-HSD的原核表达系统.经IPTG诱导后,得到了具有酶活性的融合蛋白,细菌总蛋白的表达量为0.73g/L,其中融合酶蛋白占16.4%,活性达1.38×105U/L.利用融合蛋白N末端的His-tag,经金属螯合亲和层析纯化后,得到了纯度较高的融合酶蛋白,酶蛋白的得率为68%,比活性为194.7U/mg.凝血酶切除His-tag后,经质谱鉴定,重组蛋白的分子量为26.5kD,与理论推测值基本相同.25℃以雄酮为底物,以NAD+和thio-NAD+为辅因子时,融合蛋白参与酶促反应的最适pH分别为10.5和9.4.37℃条件下酶促反应较快,25℃时的反应速度只有37℃时的52%,Q10(25℃~35℃)为1.7.25℃、pH10.5、以雄酮和各级胆汁酸为底物、NAD+为辅因子时,融合酶蛋白的动力学常数Km位于4.2~51.1μmol/L范围内.融合酶蛋白发挥催化作用并不需要金属离子的参与,而Fe3+、Fe2+、Zn2+则抑制酶活性,反应体系中加入EDTA也并不影响酶的活性.活性和纯度均较高的融合蛋白3α-HSD的获得及其生物学性质的研究,为血清总胆汁酸酶循环法测定的建立奠定了基础.
语种: 中文
原文出处: 查看原文
Citation statistics:
内容类型: 期刊论文
URI标识: http://ir.bjmu.edu.cn/handle/400002259/43777
Appears in Collections:北京大学第一临床医学院_检验科_期刊论文

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作者单位: 1.北京大学第一医院检验科,北京,100034
2.山东威海文登中心医院,威海,264400

Recommended Citation:
张国华,丛爱日,徐国宾,等. 3α-羟类固醇脱氢酶的表达、纯化和酶学性质研究[J]. 微生物学报,2004,44(4):496-499.
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