IR@PKUHSC  > 北京大学第一临床医学院  > 检验科
学科主题临床检验诊断学
3α-羟类固醇脱氢酶的表达、纯化和酶学性质研究
其他题名Overexpression, Purification and Characterization of 3α-Hydroxysteriod Dehydrogenase in Escherichia coli
张国华1; 丛爱日1; 徐国宾1; 夏铁安1
关键词睾酮丛毛单胞菌 3α-羟类固醇脱氢酶 基因表达 酶学性质 胆汁酸
刊名微生物学报
2004
DOI10.3321/j.issn:0001-6209.2004.04.019
44期:4页:496-499
收录类别中国科技核心期刊 ; 中文核心期刊 ; CSCD
文章类型Journal Article
摘要从土壤中分离睾酮丛毛单胞菌,提取其基因组DNA,PCR扩增3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)基因.以质粒pET-15b为载体,构建3α-HSD的原核表达系统.经IPTG诱导后,得到了具有酶活性的融合蛋白,细菌总蛋白的表达量为0.73g/L,其中融合酶蛋白占16.4%,活性达1.38×105U/L.利用融合蛋白N末端的His-tag,经金属螯合亲和层析纯化后,得到了纯度较高的融合酶蛋白,酶蛋白的得率为68%,比活性为194.7U/mg.凝血酶切除His-tag后,经质谱鉴定,重组蛋白的分子量为26.5kD,与理论推测值基本相同.25℃以雄酮为底物,以NAD+和thio-NAD+为辅因子时,融合蛋白参与酶促反应的最适pH分别为10.5和9.4.37℃条件下酶促反应较快,25℃时的反应速度只有37℃时的52%,Q10(25℃~35℃)为1.7.25℃、pH10.5、以雄酮和各级胆汁酸为底物、NAD+为辅因子时,融合酶蛋白的动力学常数Km位于4.2~51.1μmol/L范围内.融合酶蛋白发挥催化作用并不需要金属离子的参与,而Fe3+、Fe2+、Zn2+则抑制酶活性,反应体系中加入EDTA也并不影响酶的活性.活性和纯度均较高的融合蛋白3α-HSD的获得及其生物学性质的研究,为血清总胆汁酸酶循环法测定的建立奠定了基础.
语种中文
原文出处查看原文
引用统计
文献类型期刊论文
条目标识符http://ir.bjmu.edu.cn/handle/400002259/43777
专题北京大学第一临床医学院_检验科
作者单位1.北京大学第一医院检验科,北京,100034
2.山东威海文登中心医院,威海,264400
推荐引用方式
GB/T 7714
张国华,丛爱日,徐国宾,等. 3α-羟类固醇脱氢酶的表达、纯化和酶学性质研究[J]. 微生物学报,2004,44(4):496-499.
APA 张国华,丛爱日,徐国宾,&夏铁安.(2004).3α-羟类固醇脱氢酶的表达、纯化和酶学性质研究.微生物学报,44(4),496-499.
MLA 张国华,et al."3α-羟类固醇脱氢酶的表达、纯化和酶学性质研究".微生物学报 44.4(2004):496-499.
条目包含的文件
条目无相关文件。
个性服务
推荐该条目
保存到收藏夹
查看访问统计
导出为Endnote文件
谷歌学术
谷歌学术中相似的文章
[张国华]的文章
[丛爱日]的文章
[徐国宾]的文章
百度学术
百度学术中相似的文章
[张国华]的文章
[丛爱日]的文章
[徐国宾]的文章
必应学术
必应学术中相似的文章
[张国华]的文章
[丛爱日]的文章
[徐国宾]的文章
相关权益政策
暂无数据
收藏/分享
所有评论 (0)
暂无评论
 

除非特别说明,本系统中所有内容都受版权保护,并保留所有权利。