北京大学医学部机构知识库
Advanced  
IR@PKUHSC  > 北京大学第一临床医学院  > 检验科  > 期刊论文
学科主题: 临床检验诊断学
题名:
睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达
其他题名: Construction and Overexpression of The Plasmid Vector of 3α-Hydroxysteroid Dehydrogenase From Comamonas testosteroni
作者: 张国华1; 徐国宾1; 刘英民1; 夏铁安1
关键词: 睾酮假单胞菌 ; 3α-羟类固醇脱氢酶 ; 重组质粒 ; 基因表达 ; 胆汁酸
刊名: 生物化学与生物物理进展
发表日期: 2002
DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2002.06.029
卷: 29, 期:6, 页:966-969
收录类别: 中国科技核心期刊 ; 中文核心期刊
文章类型: Journal Article
摘要: 从土壤中分离睾酮假单胞菌,提取其基因组DNA,PCR扩增3a-羟类固醇脱氢酶(3α-hsd)基因,将扩增产物用Nde Ⅰ/BamHⅠ消化,切下目的基因片段克隆到质粒pET-15b中构建重组pET-15b.将重组pET-15b转化入E.coli DH5a中,经酶谱分析和测序,鉴定出正确的重组质粒pET-15b.将重组pET-15b转化入宿主菌E.coli BL21(DE3)pLysS中,用硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达.提取细菌总蛋白质进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析并测定酶活性.粗提物中酶活性高达2.45×105 U/L.利用重组蛋白中的6个组氨酸(His)组成的"标签"进行亲和层析,经一步金属螯合亲和层析纯化后,重组蛋白在SDS-PAGE上呈现出均一的单一条带,回收率达68%.活性和纯度均较高的目的蛋白3α-HSD的获得,为血清总胆汁酸酶循环法测定奠定了基础.
语种: 中文
原文出处: 查看原文
Citation statistics:
内容类型: 期刊论文
URI标识: http://ir.bjmu.edu.cn/handle/400002259/43779
Appears in Collections:北京大学第一临床医学院_检验科_期刊论文

Files in This Item:

There are no files associated with this item.


作者单位: 1.北京大学第一医院检验科,北京,100034
2.青岛市环保局崂山分局,青岛,266101

Recommended Citation:
张国华,徐国宾,刘英民,等. 睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达[J]. 生物化学与生物物理进展,2002,29(6):966-969.
Service
Recommend this item
Sava as my favorate item
Show this item's statistics
Export Endnote File
Google Scholar
Similar articles in Google Scholar
[张国华]'s Articles
[徐国宾]'s Articles
[刘英民]'s Articles
CSDL cross search
Similar articles in CSDL Cross Search
[张国华]‘s Articles
[徐国宾]‘s Articles
[刘英民]‘s Articles
Related Copyright Policies
Null
Social Bookmarking
Add to CiteULike Add to Connotea Add to Del.icio.us Add to Digg Add to Reddit

Items in IR are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.

 

 

Valid XHTML 1.0!
Copyright © 2007-2017  北京大学医学部 - Feedback
Powered by CSpace