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学科主题: 临床检验诊断学
题名:
睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达
其他题名: Construction and Overexpression of The Plasmid Vector of 3α-Hydroxysteroid Dehydrogenase From Comamonas testosteroni
作者: 张国华1; 徐国宾1; 刘英民1; 夏铁安1
关键词: 睾酮假单胞菌 ; 3α-羟类固醇脱氢酶 ; 重组质粒 ; 基因表达 ; 胆汁酸
刊名: 生物化学与生物物理进展
发表日期: 2002
DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2002.06.029
卷: 29, 期:6, 页:966-969
收录类别: 中国科技核心期刊 ; 中文核心期刊
文章类型: Journal Article
摘要: 从土壤中分离睾酮假单胞菌,提取其基因组DNA,PCR扩增3a-羟类固醇脱氢酶(3α-hsd)基因,将扩增产物用Nde Ⅰ/BamHⅠ消化,切下目的基因片段克隆到质粒pET-15b中构建重组pET-15b.将重组pET-15b转化入E.coli DH5a中,经酶谱分析和测序,鉴定出正确的重组质粒pET-15b.将重组pET-15b转化入宿主菌E.coli BL21(DE3)pLysS中,用硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达.提取细菌总蛋白质进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析并测定酶活性.粗提物中酶活性高达2.45×105 U/L.利用重组蛋白中的6个组氨酸(His)组成的"标签"进行亲和层析,经一步金属螯合亲和层析纯化后,重组蛋白在SDS-PAGE上呈现出均一的单一条带,回收率达68%.活性和纯度均较高的目的蛋白3α-HSD的获得,为血清总胆汁酸酶循环法测定奠定了基础.
语种: 中文
原文出处: 查看原文
Citation statistics:
内容类型: 期刊论文
URI标识: http://ir.bjmu.edu.cn/handle/400002259/43779
Appears in Collections:北京大学第一临床医学院_检验科_期刊论文

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作者单位: 1.北京大学第一医院检验科,北京,100034
2.青岛市环保局崂山分局,青岛,266101

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张国华,徐国宾,刘英民,等. 睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达[J]. 生物化学与生物物理进展,2002,29(6):966-969.
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