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学科主题: 泌尿外科学
题名:
提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体的表达和抗体的功能鉴定
其他题名: Expression of human-mouse chimeric antibody ch-BD1 and its affinity to human bladder cancer in vitro and in vivo
作者: 白银1; 俞莉章1; 吕英谦1; 艾军魁1; 周丽君1; 张春丽1; 王琰1
关键词: 膀胱肿瘤 ; 嵌合抗体 ; 真核表达载体 ; CHO细胞
刊名: 中华医学杂志
发表日期: 2003
DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2003.04.021
卷: 83, 期:4, 页:333-337
收录类别: 中国科技核心期刊 ; 中文核心期刊 ; CSCD
文章类型: Journal Article
摘要: 目的探讨人-鼠嵌合抗体ch-BD1体内和体外的表达和功能. 方法用分子生物学方法得到系列弱化表达的双氢叶酸还原酶(DHFR)基因片段,将其克隆入载体pDHL-BD1中构建得系列弱化表达DHFR基因的人-鼠嵌合抗体pWSD1-BD1, pWSD2-BD1, 和pWSD3-BD1.将这些嵌合抗体以及pDHL-BD1分别转染缺陷表达DHFR基因的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)/DHFR-细胞,以Northern印迹鉴定其DHFR基因表达水平.将不同浓度的氨甲蝶呤(MTX)加入转染细胞的培养液,测定上清中的抗体水平.用99m标记纯化的ch-BD1,加入系列稀释的人膀胱癌EJ细胞溶液中,测定结合在细胞上的抗体放射活性,计算标记抗体的亲和常数.将人膀胱癌EJ细胞注射入3只Balb/C小鼠后肢根部,4周后对肿瘤进行放射免疫显像.将标记抗体注射入小鼠尾静脉,分别于2 h, 6 h, 22 h 和24 h后进行放射显像. 结果构建载体的DHFR基因表达活性由强至弱的顺序为pDHL-BD1>pWS1-BD1>pWS3-BD1>pWS2-BD1.MTX浓度为10-6 mol/L时ch-BD1的表达水平与DHFR基因的基础表达水平明显相关,DHFR基础水平越高抗体的表达水平亦越高.EJ细胞与标记抗体孵育后,ch-BD1的免疫活性分数为76%,亲和常数为3.56×109 M-1; 鼠单抗BD1的免疫活性分数为81%,亲和常数为1.22×109 M-1.99m标记的ch-BD1经尾静脉注射入小鼠体内后6 h主要分布于肿瘤部位,22 h后特异地分布于肿瘤部位,24 h后仍浓聚于此. 结论 DHFR基因基础表达水平的降低有效地增加MTX对外源基因的扩增作用.抗人膀胱癌人-鼠嵌合的表达具有理想的体内外对人膀胱癌的亲和活性,具有一定的临床应用前景.
语种: 中文
原文出处: 查看原文
Citation statistics:
内容类型: 期刊论文
URI标识: http://ir.bjmu.edu.cn/handle/400002259/44983
Appears in Collections:北京大学第一临床医学院_泌尿外科_期刊论文

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作者单位: 1.100034,北京大学泌尿外科研究所,北京大学第一医院泌尿外科
2.解放军海军总医院中心实验室
3.100034,北京大学泌尿外科研究所,北京大学第一医院同位素科

Recommended Citation:
白银,俞莉章,吕英谦,等. 提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体的表达和抗体的功能鉴定[J]. 中华医学杂志,2003,83(4):333-337.
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