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学科主题: 骨科学
题名:
重组人骨形态发生蛋白7的腺相关病毒载体的构建
其他题名: Construction of an Adeno - associated Virus Vector Carrying Human Bone Morphogenetic Protein - 7 gene
作者: 杨民; 马庆军; 郭均; 党耕町
关键词: 骨形态发生蛋白7 ; 腺相关病毒 ; 基因克隆
刊名: 中国骨与关节损伤杂志
发表日期: 2005
DOI: 10.3969/j.issn.1672-9935.2005.07.010
卷: 20, 期:7, 页:458-461
收录类别: 中国科技核心期刊
文章类型: Journal Article
摘要: 目的构建重组人骨形态发生蛋白7(hBMP7)的腺相关病毒(AAV)载体.方法通过RT-PCR方法,从HEK293细胞中扩增hBMP7全长cDNA并亚克隆入通用型AAV载体质粒pSNAV.将pSNAV-hBMP7质粒DNA转染BHK-21细胞,筛选出携带hBMP7的AAV载体细胞株-BHK-21细胞.用能表达Rap和Cap的重组1型单纯疱疹病毒HSV1-rc/ΔUL2按MOI=0.1感染BHK-21载体细胞株后收获病毒液,通过氯仿-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提纯化病毒.结果所克隆的hBMP7全长cDNA经测序证实和已知hBMP7序列完全一致.通过用能表达Rap和Cap的重组1型单纯疱疹病毒HSV1-rc/ΔUL2感染携带hBMP7基因的AAV载体细胞株BHK-21细胞的方法获得了滴度为2×1012vg/ml、纯度达99%的重组人骨形态发生蛋白7的腺相关病毒载体(AAV-hBMP7).结论RT-PCR方法从HEK293细胞中扩增克隆hBMP全长cDNA是一种有效可行的方法.成功地构建了高滴度、高纯度的AAV-hBMP7载体,为进一步体内及体外研究基因治疗促进骨愈合提供了有力的工具.
语种: 中文
原文出处: 查看原文
Citation statistics:
内容类型: 期刊论文
URI标识: http://ir.bjmu.edu.cn/handle/400002259/70861
Appears in Collections:北京大学第三临床医学院_骨科_期刊论文

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作者单位: 北京大学第三医院骨科,北京市,100083

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杨民,马庆军,郭均,等. 重组人骨形态发生蛋白7的腺相关病毒载体的构建[J]. 中国骨与关节损伤杂志,2005,20(7):458-461.
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