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学科主题: 骨科学
题名:
重组人骨形态发生蛋白7腺病毒载体构建及在小鼠成肌细胞中的表达
其他题名: Construction of the recombinant adenoviral vector carrying human bone morphogenetic protein-7 cDNA and its expression in myoblasts of rats
作者: 杨民; 蔡善保; 马庆军; 郭均; 党耕町
关键词: 骨折愈合 ; 骨形态发生蛋白质类 ; 腺病毒,人 ; 基因治疗
刊名: 中国临床康复
发表日期: 2005
DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2005.06.023
卷: 9, 期:6, 页:56-58
文章类型: Journal Article
摘要: 目的:构建重组人骨形态发生蛋白7的腺病毒载体(AdBMP7),并观察其在小鼠成肌细胞C2C12细胞中的表达情况.方法:实验于2004-05/10在北京大学医学部完成.RT-PCR方法从HKE293细胞中克隆出hBMP7 cDNA并亚克隆入穿梭质粒pAdtrackcmv中,构建pAdtrackcmv-hBMP7质粒.该质粒和腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183菌中进行同源重组后挑选阳性重组体pAd-hBMP7质粒.线性化pAd-hBMP7质粒转染293A细胞后检测病毒噬斑形成情况,并于转染后9 d收获病毒,大量扩增并制备高纯度、高滴度的AdBMP7.将AdBMP7按MOI=100来感染C2C12细胞,48 h后分别应用RT-PCR和免疫组化方法来检测hBMP7在mRNA和蛋白水平的表达.结果:成功克隆出hBMP7 cDNA,酶切鉴定pAdtrackcmv-hBMP7和pAd-hBMP7质粒正确重组,获得纯化后滴度达到5×1012vp/mL的AdBMP7.AdBMP7能有效感染C2C12细胞并表达hBMP7蛋白.结论:应用AdEasy-1腺病毒载体系统可在短期内制备高滴度的携带GFP和hBMP7的重组腺病毒AdBMP7,并在为进一步研究BMP7基因治疗促进骨愈合打下基础.
语种: 中文
原文出处: 查看原文
Citation statistics:
内容类型: 期刊论文
URI标识: http://ir.bjmu.edu.cn/handle/400002259/70862
Appears in Collections:北京大学第三临床医学院_骨科_期刊论文

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作者单位: 北京大学第三医院骨科,北京市,100083

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杨民,蔡善保,马庆军,等. 重组人骨形态发生蛋白7腺病毒载体构建及在小鼠成肌细胞中的表达[J]. 中国临床康复,2005,9(6):56-58.
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