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学科主题: 临床检验诊断学
题名:
定量聚合酶链反应技术及在临床实验室应用的价值
作者: 张捷
刊名: 中华检验医学杂志
发表日期: 2001
DOI: 10.3760/j:issn:1009-9158.2001.01.031
卷: 24, 期:1, 页:60-61
收录类别: 中国科技核心期刊 ; 中文核心期刊 ; CSCD
文章类型: Journal Article
摘要: 随着分子生物学技术的发展,聚合酶链反应(PCR)技术已逐渐应用于遗传性疾病、肿瘤及感染性疾病等方面的诊断,如检测临床标本中病原体核酸序列、肿瘤基因突变情况、遗传性疾病的基因序列、人类白细胞表面抗原(HLA)配型、法医学方面的鉴定工作等。目前基因芯片的问世,将分子生物学技术又推向一个新的高潮。现就临床实验室开展PCR技术及PCR技术检测病原微生物及肿瘤基因的临床意义和定量PCR技术,谈谈我们的看法。 1.目前国内临床实验室应用PCR技术存在的问题:在设施方面,如仪器显示的温度与孔内的温度不一致,有孔内差;自动化程度较低,人工操作人为误差较大;实验室布局不合理,不能满足3个分开的房间进行分阶段操作(第1间实验室为混合试剂和质控,第2间实验室为标本提取和试剂混合,第3间实验室为PCR扩增及产物检测,工作人员应从第1间依次到第3间实验室,不能返回工作。室内空气流向依次从第1间到第3间实验室,不能逆流,以防止空气污染);加样器及试剂等容易污染导致假阳性。另外,标本采集及保存不合适和操作不当易出现假阴性。例如检测痰中结核杆菌,标本采集一定是痰而不是唾液。血清中检测HCV-RNA标本保存不当,使病原体被破坏.操作者不戴手套或说话唾液溅入标本,RNA降解,失去PCR的模板,造成假阴性结果。合理设计寡核苷酸序列,最好在保守区,特异性强,无干扰。 琼脂糖凝胶电泳鉴别PCR产物的影响因素较多。如模板量大则拖尾现象严重,非特异性干扰带多。结果难于清楚判断。标本中有抑制物(Hb,高浓度尿素)均可出现假阴性。 目前美国病理学会(CAP)等组织以及临床实验室改进修正案(CLIA 1988)要求正规检测方法是先行PCR扩增,然后进行杂交来判断结果。但美国一些实验室,如印第安纳大学医学中心的病理和医学实验室用PCR方法检测临床标本中乙肝病毒(HBV)、EB病毒(EBV)、人巨细胞病毒(CMV)的DNA。他们认为在他们的实验室里,用琼脂糖凝胶电泳和电泳后再杂交的两种判断结果是一致的。因为他们实验室条件非常严格,而且每年都要通过美国CAP检查。但仍有些检测项目未得到美国FDA的批准。 2 .PCR技术检测的临床意义:我们认为对灵敏度和特异性基本上达到临床需要的检测技术,不必一律采用PCR技术。目前没有其他诊断技术可以检测的疾病,如基因缺失、易位、突变及病原体需要较长时间培养或培养难度较大的疾病应考虑用PCR方法。如人类免疫缺陷病毒(HIV)是一种慢性病毒,在细胞内的繁殖水平比较低,感染后潜伏期较长,病毒难以培养而且需要较长时间培养。在对HIV抗原(HIV-Ag)和抗体(HIV-Ab)的检测结果难以判断时,可用PCR技术作为确认手段。当前临床标本一般仅检测HIV-Ab。在美国,血液制品既检测HIV-Ab也检测HIV-P24Ag 。国外有学者报道,感染HIV的患者血清HIV-P24Ag出现早于HIV-Ab10天左右。发现HIV-P24Ag(+)者,HIV PCR(+)。但HIV PCR(+)者,HIV- P24Ag可呈现(-),此时患者已具有传染性。PCR技术可用于艾滋病的早期诊断,定量PCR技术还是艾滋病疗效观察的有效检测手段。 用PCR和杂交方法对HCV基因分型、早期诊断和治疗监测均具有较大的临床意义,这已被国内外医学界的工作者公认。 结核分枝杆菌(MTB)培养时间一般要30~50天,培养出来的分枝杆菌还要鉴定是人型还是鸟型。涂片检查所需的抗酸杆菌也要一定的浓度。因此可以采用PCR方法检测。但PCR技术不能完全取代结核杆菌培养。PCR在药敏结果判断方面亦不理想。 当前有检测沙眼衣原体抗原的试剂盒,特异性高,但敏感性不甚满意。衣原体需在细胞中培养后进行鉴定,对临床常规检验工作有一定的难度。应用PCR技术检测沙眼衣原体有一定的临床意义。 美国FDA已批准HIV、MTB、沙眼衣原体的PCR或杂交检测试剂盒。也批准了HPV的过筛检测,对于HPV各型的检测,目前尚未批准。MTB的靶序列是16 s DNA的584bp。其最后带用杂交检测。沙眼衣原体的检测试剂盒于1993年通过FDA批准,目前用特殊探针进行杂交后用免疫化学法检测。
语种: 中文
原文出处: 查看原文
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内容类型: 期刊论文
URI标识: http://ir.bjmu.edu.cn/handle/400002259/71550
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作者单位: 北京大学第三医院检验科,

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张捷. 定量聚合酶链反应技术及在临床实验室应用的价值[J]. 中华检验医学杂志,2001,24(1):60-61.
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