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学科主题临床检验诊断学
重组人胰腺α-淀粉酶在毕赤酵母菌中的分泌性表达
其他题名Screated expression and purification of recombinant human pancreatic α-amylase in Pichia pastoris
王天成; 徐国宾; 夏铁安
关键词毕赤酵母 基因表达 人胰腺α-淀粉酶
刊名实用医学杂志
2007
DOI10.3969/j.issn.1006-5725.2007.22.009
23期:22页:3492-3495
收录类别中国科技核心期刊 ; 中文核心期刊
文章类型Journal Article
摘要目的:构建人胰腺α-淀粉酶(HPA)真核表达载体并在毕赤酵母中进行表达.方法:从人胰腺组织中提取总RNA,逆转录为cDNA,RT-PCR法扩增HPA基因,将其插入到酵母分泌性表达质粒pPIC9中,筛选得到正确序列的重组质粒pPIC9-HPA,用该质粒转化毕赤酵母菌GS115,PCR方法筛选阳性克隆,摇瓶培养、0.5%甲醇诱导重组HPA分泌性表达,测定培养上清中的淀粉酶活力;重组HPA用冷乙醇-糖原亲和沉淀、疏水层析纯化并以SDS-PAGE电泳和Western blot方法鉴定.结果:成功构建了重组HPA真核酵母表达载体,重组质粒酶切和核酸测序结果与预期-致,显示HPA基因正确插入质粒pPIC9中;以pPIC9-HPA转化毕赤酵母菌GS115,实现了重组HPA在毕赤酵母菌分泌性表达;重组HPA经纯化后鉴定具天然HPA相同的免疫原性,其对可溶性淀粉酶的水解产物和酶动力学分析与天然HPA相近.结论:成功实现了HPA在毕赤酵母真核表达系统中的分泌性表达,重组HPA与天然HPA具有相似的催化和酶动力学性质.本实验为下一步作为临床HPA测定标准品的研制准备了实验基础.
语种中文
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文献类型期刊论文
条目标识符http://ir.bjmu.edu.cn/handle/400002259/71563
专题北京大学第三临床医学院_检验科
作者单位1.北京大学第三医院检验科,100083
2.北京大学第一医院检验科,100049
推荐引用方式
GB/T 7714
王天成,徐国宾,夏铁安. 重组人胰腺α-淀粉酶在毕赤酵母菌中的分泌性表达[J]. 实用医学杂志,2007,23(22):3492-3495.
APA 王天成,徐国宾,&夏铁安.(2007).重组人胰腺α-淀粉酶在毕赤酵母菌中的分泌性表达.实用医学杂志,23(22),3492-3495.
MLA 王天成,et al."重组人胰腺α-淀粉酶在毕赤酵母菌中的分泌性表达".实用医学杂志 23.22(2007):3492-3495.
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