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学科主题: 临床检验诊断学
题名:
重组人胰腺α-淀粉酶在毕赤酵母菌中的分泌性表达
其他题名: Screated expression and purification of recombinant human pancreatic α-amylase in Pichia pastoris
作者: 王天成; 徐国宾; 夏铁安
关键词: 毕赤酵母 ; 基因表达 ; 人胰腺α-淀粉酶
刊名: 实用医学杂志
发表日期: 2007
DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2007.22.009
卷: 23, 期:22, 页:3492-3495
收录类别: 中国科技核心期刊 ; 中文核心期刊
文章类型: Journal Article
摘要: 目的:构建人胰腺α-淀粉酶(HPA)真核表达载体并在毕赤酵母中进行表达.方法:从人胰腺组织中提取总RNA,逆转录为cDNA,RT-PCR法扩增HPA基因,将其插入到酵母分泌性表达质粒pPIC9中,筛选得到正确序列的重组质粒pPIC9-HPA,用该质粒转化毕赤酵母菌GS115,PCR方法筛选阳性克隆,摇瓶培养、0.5%甲醇诱导重组HPA分泌性表达,测定培养上清中的淀粉酶活力;重组HPA用冷乙醇-糖原亲和沉淀、疏水层析纯化并以SDS-PAGE电泳和Western blot方法鉴定.结果:成功构建了重组HPA真核酵母表达载体,重组质粒酶切和核酸测序结果与预期-致,显示HPA基因正确插入质粒pPIC9中;以pPIC9-HPA转化毕赤酵母菌GS115,实现了重组HPA在毕赤酵母菌分泌性表达;重组HPA经纯化后鉴定具天然HPA相同的免疫原性,其对可溶性淀粉酶的水解产物和酶动力学分析与天然HPA相近.结论:成功实现了HPA在毕赤酵母真核表达系统中的分泌性表达,重组HPA与天然HPA具有相似的催化和酶动力学性质.本实验为下一步作为临床HPA测定标准品的研制准备了实验基础.
语种: 中文
原文出处: 查看原文
Citation statistics:
内容类型: 期刊论文
URI标识: http://ir.bjmu.edu.cn/handle/400002259/71563
Appears in Collections:北京大学第三临床医学院_检验科_期刊论文

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作者单位: 1.北京大学第三医院检验科,100083
2.北京大学第一医院检验科,100049

Recommended Citation:
王天成,徐国宾,夏铁安. 重组人胰腺α-淀粉酶在毕赤酵母菌中的分泌性表达[J]. 实用医学杂志,2007,23(22):3492-3495.
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