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学科主题: 临床检验诊断学
题名:
抗红细胞H抗原单链抗体中可变区重链和轻链顺序对其活性的影响
其他题名: Effect of domain order on the activity of single chain antibody derived from the monoclonal antibody against H antigen on human erythrocyte
作者: 杨怡; 刘明; 王蕊; 张捷; 章金刚
关键词: 单链抗体,H抗原 ; 重链/轻链,可变区 ; 基因表达 ; 抗体活性 ; 红细胞
刊名: 中国输血杂志
发表日期: 2009
卷: 22, 期:2, 页:89-93
收录类别: 中国科技核心期刊 ; 中文核心期刊 ; CSCD
文章类型: Journal Article
摘要: 目的 探讨抗红细胞H抗原单链抗体(scFv)中可变区重链(VH)和轻链(VL)顺序对该单链抗体活性的影响.方法 采用PCR方法 从质粒pMD-18T-2E8scFv(VH-linker-VL型)中克隆出VL和VH可变区基因,通过重叠引物延伸法将这2种基因连接,并引入连接肽(linker)编码序列,构建VL-linker-VH型的单链抗体基因,将VL-linker-VH和原有的VH-linker-VL2种形式的单链抗体基因分别插入到原核表达载体pET-his中,转化BL21(DE3)plysS细胞,异丙基硫代-B-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用镍亲和层析柱纯化;免疫荧光法、竞争ELISA和低离子聚凝胺法检测纯化后scFv活性.结果 酶切及测序表明VL-linker-VH型单链抗体表达载体构建成功,SDS-PAGE和Western blot分析表明VL-linker-VH和VH-linker-VL2型抗人红细胞scFv均在BL21菌中获得高效表达,重组蛋白的相对分子质量(Mr)为27kD,表达产物以包涵体形式存在,分别占菌体总蛋白的26.8%和27.6%,纯化后获得了高纯度的scFv;免疫荧光、竞争ELISA和低离子聚凝胺试验分析证明2种单链抗体均可特异结合红细胞表面H抗原,VH-linker-VL结合活性高于VL-linker-VH.结论 成功制备了VL-linker-VH型2E8scFv;VH-linker-VL型2E8scFv抗原的纯合活性高于VL-linker-VH型2ESscFv.
语种: 中文
原文出处: 查看原文
Citation statistics:
内容类型: 期刊论文
URI标识: http://ir.bjmu.edu.cn/handle/400002259/71649
Appears in Collections:北京大学第三临床医学院_检验科_期刊论文

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作者单位: 1.北京大学第三医院检验科,北京100191
2.军事医学科学院野战输血研究所
3.军事医学科学院野战输血研究所
4.北京大学第三医院检验科,北京,100191

Recommended Citation:
杨怡,刘明,王蕊,等. 抗红细胞H抗原单链抗体中可变区重链和轻链顺序对其活性的影响[J]. 中国输血杂志,2009,22(2):89-93.
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